Интерпретация анализа крови на коклюш методом РНГА

Анализы на коклюш

Современная диагностика коклюша позволяет быстро поставить правильный диагноз и назначить адекватное лечение, что позволяет значительно облегчить состояние больного и провести своевременные профилактические мероприятия, предотвратив заражение окружающих и контактных лиц. Анализ на коклюш с применением бактериологического метода исследования является основным в диагностике заболевания.

Однако опыт многих исследований доказывает, что для точной лабораторной диагностики заболевания необходимо использовать несколько взаимодополняющих методик. Наиболее эффективная комбинация — сочетание бактериологического метода и полимеразной цепной реакции (ПЦР).

Рис. 1. Спазматический приступообразный кашель — доминирующий симптомом коклюша у детей.

Клинические методы диагностики коклюша

Распознавание коклюша на ранних этапах развития заболевания претерпевает большие трудности, что связано с несколькими факторами:

• Болезнь развивается медленно. Ее кульминация приходится на 2 — 3 неделю после возникновения первых симптомов заболевания.
• Первичный токсикоз и выраженная температурная реакция вначале заболевания, так характерные для многих детских инфекционных заболеваний, при коклюше отсутствуют. Поэтому часто лабораторная диагностика запаздывает.
• У привитых детей и взрослых чаще всего регистрируются атипичные формы заболевания, при которых меняется характеристика кашля (отсутствуют приступы спазматического кашля и репризы).

Критерии постановки диагноза коклюша в предсудорожный (катаральный) период:

• Контакт с больными, у которых отмечается длительный кашель.
• Медленное развитие заболевания. Нормальная или небольшая температура тела. Удовлетворительное состояние больного.
• Отсутствие выраженных катаральных явлений.
• Вначале покашливание, а потом упорный сухой кашель до перехода в приступообразный спазматический кашель длится 1 — 2 недели.
• Эффект от симптоматической терапии отсутствует.
• Хрипы в легких часто не выслушиваются. Высокое содержание лейкоцитов (лейкоцитоз) и лимфоцитов (лимфоцитоз) при нормальной скорости оседания эритроцитов (СОЭ).
• Обнаружение в посевах возбудителей коклюша (Bordetella pertussis).

Рис. 2. На фото бактерии Bordetella pertussis розового цвета под микроскопом (окраска по Граму). Коклюшные палочки короткие, коковидной формы, концы закруглены, длина составляет 0,5 — 2 мкм, в мазках располагаются отдельно, реже — попарно.

Рис. 3. Вид бактерий коклюша в электронный микроскоп.

Бактериологическая диагностика коклюша

Выделение возбудителей коклюша из носоглоточной слизи — классический метод лабораторного подтверждения заболевания. Высеваемость возбудителей редко достигает 80%. В среднем он не превышает 10 — 30%. Причиной этому являются:

• Медленный рост коклюшных палочек на питательных средах.
• Низкое качество питательных сред.
• Позднее обследование больного.
• Загрязнение исследуемого материала бактериальной флорой.
• Погрешности при заборе исследуемого материала.
• Применение антибиотиков до момента забора материала для бактериологического исследования.

Материалом для бактериологического исследования служит мазок из носовых ходов (обеих) и задней стенки носоглотки (не из гортани!).

Для взятия мазка применяется тампон из дакрона или используется метод «кашлевых пластинок».

Посев производится сразу на питательную или транспортную среды. На транспортной среде материал хранится не более одних суток. Предварительный ответ получается на 3 — 5 сутки. Окончательный ответ получается на 5 — 7 сутки.

Обследованию подлежат лица с подозрением на заболевание и лица, кашель у которых сохраняется более 7-и, но не более 30-и дней.

Рис. 4. На фото колонии Bordetella pertussis. Для культивирования используется среда Борде-Жангу (фото справа) или казеиново-угольный агар (фото слева).

На этих средах формирование колоний происходит на 3 — 4 день после посева. Колонии микробов блестящие, серовато-кремовой окраски, напоминают по внешнему виду капельки ртути, имеют вязкую консистенцию.

После снятия колоний с питательной среды остается сметанообразный след.

Рис. 5. При просмотре колоний Bordetella pertussis в световом микроскопе можно видеть, как колонии отбрасывают тень (световой конус).

Анализ на коклюш с применением ПЦР

Диагностика коклюша с применением ПЦР (полимеразной цепной реакции) является самой перспективной методикой в современных условиях. Высокая чувствительность теста позволяет выявлять ДНК бактерий, даже если в исследуемом материале их несколько единиц.

Методика определения ДНК Bordetella pertussis с помощью ПЦР была разработана в Новосибирске в 1999 году. Она имеет целый ряд преимуществ перед бактериологическим методом:

• Высокая чувствительность данного метода. Даже наличие одного или нескольких возбудителей в пробе позволяет получить положительный результат.
• Данный метод является высокоспецифичным. Удельный вес положительных результатов составляет 85 — 100%. Загрязнение вторичной микрофлорой не влияет на результат исследования.
• Результат получается в течение 1-го дня.

Данный метод диагностики не заменяет культуральный метод.

Бактериологический метод и методика ПЦР являются взаимодополняющими и достоверными тестами при выявлении Bordetella pertussis.

Рис. 6. На фото виды колоний Bordetella pertussis.

Анализ на коклюш с применением методики флюоресцирующих антител

Низкий удельный вес бактериологического подтверждения заболевания стал толчком к разработке других, более чувствительных методов идентификации возбудителя коклюша. В 60-е годы появился метод определения Bordetella pertussis с помощью флюоресцирующих антител.

Специально обработанные мазки просматриваются в флюоресцентный микроскоп. К проведению данного теста допускается только высококвалифицированный персонал, используются качественные реагенты. В противном случае возможно большое количество ложноположительных результатов.

Данная методика в практической медицине используется редко.

Рис. 7. Специально обработанные мазки просматриваются в флюоресцентный микроскоп.

Анализ на коклюш с помощью серологических реакций

Возбудители коклюша содержат вещества (антигены), способные вызвать иммунный ответ в организме инфицированного человека (образование антител). Благодаря серологическим исследованиям выявляются и изучаются антитела и антигены в сыворотке крови больного.

В их основе лежат иммунные реакции организма. Специфичность данного вида исследования не достигает 100%, поэтому результаты серологического исследования оцениваются только с учетом клинической картины заболевания.

Серологические методы используются так же для проведения эпидемиологического анализа.

Для диагностики коклюша используется несколько тестов:

• Иммуноферментный анализ (ИФА) — чувствительный, специфичный и относительно недорогой тест. Для его проведения используются белковые антигены бактерий коклюша, с помощью которых измеряются сывороточные иммуноглобулины классов G, M и A, уровень которых повышаются в крови после перенесенного заболевания или проведения иммунизации. Сывороточные иммуноглобулины M повышаются в ранние сроки заболевания, сывороточные иммуноглобулины G — в более поздние сроки.
• Диагностика коклюша на поздних сроках заболевания осуществляется с помощью реакций агглютинации: РПГА, РНГА и РА. В основе таких реакций лежит способность корпускулярных антигенов склеиваться с помощью антител.

Анализ на коклюш с применением экспресс-методов

Экспресс-методы лабораторной диагностики коклюша позволяют за несколько минут определить антигены в слизи задней стенки глотки.

При использовании реакции непрямой иммунофлюоресценции (РНИФ) врач может получить результаты через 2 — 6 часов.

При использовании метода латексной микроагглютинации (ЛМА) антигены коклюшных бактерий выявляются через 30 — 40 минут.

Применение методов экспресс-диагностики увеличивают в несколько раз удельный вес лабораторно подтвержденных случаев заболевания.

Анализ на коклюш с использованием гематологического метода

Изменения клеточного состава крови: высокое содержание лейкоцитов (лейкоцитоз) и лимфоцитов (лимфоцитоз) при нормальной скорости оседания эритроцитов (СОЭ) чаще выявляются у невакцинированных детей.

В какой бы форме не протекал коклюш, сегодня врачи имеют возможность в ранние сроки провести лабораторную диагностику этого заболевания.

Рис. 8. На фото слева лейкоциты, справа — лимфоциты. При коклюше их количество значительно увеличивается.

Дифференциальная диагностика коклюша

Метод дифференциальной диагностики позволяет исключить целый ряд возможных заболеваний у больных и установить единственно правильный диагноз. Правильно проведенная дифференциальная диагностика коклюша позволяет своевременно назначить больному адекватное лечение, тем самым облегчив течение заболевания.

Коклюш следует дифференцировать от ОРВИ, паракоклюша, бронхита, бронхиальной астмы, наличия инородных тел в дыхательных путях, пневмоний, туберкулезного бронхоаденита и др.

• Самые большие трудности представляет диагностика заболевания в катаральном периоде. Коклюш в этот период имеет много сходных черт с целой группой острых респираторных вирусных заболеваний, а так же с корью и паракоклюшем. Для коклюша в этот период характерен упорный, нарастающий кашель и отсутствие или слабая выраженность катаральных явлений верхних дыхательных путей. В этот период необходимо применять экспресс-методики и бактериологическую диагностику коклюша.
• В период приступов спазматического кашля коклюш следует различать от острых респираторных заболеваний с обструктивным синдромом, острых вирусных заболеваний с преимущественным поражением нижних отделов респираторного аппарата, респираторного микоплазмоза, туберкулезного бронхоаденита, аспирации инородного тела, опухоли средостения, бронхолегочной формой муковисцидоза.

Рис. 9. Современная диагностика коклюша позволяет быстро поставить правильный диагноз. А своевременное адекватное лечение позволит значительно облегчить состояние больного ребенка и провести профилактические мероприятия, тем самым предотвратив заражение контактных лиц.

 

ССЫЛКИ ПО ТЕМЕ

Статьи раздела “Коклюш”Самое популярное  

Источник: http://microbak.ru/infekcionnye-zabolevaniya/koklyush/diagnostika-2.html

Возбудители коклюша и паракоклюша (Bordetella pertussis и Bordetella parapertussis), полуколичественное определение антител

array(20) { [“catalog_code”]=> string(6) “050001” [“name”]=> string(190) “Возбудители коклюша и паракоклюша (Bordetella pertussis и Bordetella parapertussis), полуколичественное определение антител” [“period”]=> string(1) “2” [“period_max”]=> string(1) “4” [“period_unit_name”]=> string(6) “к.д.

” [“cito_period”]=> NULL [“cito_period_max”]=> NULL [“cito_period_unit_name”]=> NULL [“group_id”]=> string(4) “2545” [“id”]=> string(4) “1475” [“url”]=> string(84) “vozbuditeli-koklusha-i-parakoklusha-polukolichestvennoje-opredelenije-antitel_050001” [“podgotoa”]=> string(291) “

Не менее 3 часов после последнего приема пищи.

Можно пить воду без газа.

Ограничения в приеме биоматериала

” [“opisanie”]=> string(4621) “

Метод исследования: РПГА

Коклюш – острая инфекционная болезнь с воздушно-капельным механизмом передачи возбудителя, характеризуется длительным спазматическим кашлем с поражением дыхательной, сердечно-сосудистой и нервной систем.

Возбудитель коклюша – Bordetella pertussis – грамотрицательная коккобацилла. B.parapertussis вызывает паракоклюш – заболевание, подобное коклюшу, но с более легким течением.

Определение антител информативно на поздних сроках заболевания, когда применение прямых методов (ПЦР) ограничено.

Оптимальные сроки для серологической диагностики коклюша и паракоклюша – с 3 по 6 неделю с момента проявления клинических симптомов заболевания.

Не рекомендуется в течение 1 года после вакцинации против коклюша проводить серологическое исследование в диагностических целях.

Следует учитывать, что у детей в возрасте до 3 месяцев собственные антитела не вырабатываются, но могут присутствовать материнские антитела, которые, как правило, определяются в низких титрах.

У детей до 6 лет, вакцинированных против коклюша, можно использовать только пробы крови, взятые в динамике (парные сыворотки), причем первый раз кровь берется не ранее чем через 3 недели от начала заболевания, повторно – спустя 2 недели.

Показания к исследованию:

• Лабораторное подтверждение коклюша
• Обследование детей с приступообразным кашлем более 5-7 дней
• Эпидемиологические исследования
• Оценка эффективности вакцинопрофилактики

Интерпретация результатов:

Референсные значения (вариант нормы):

Параметр Референсные значения Ед. изм.

Anti-Bordetella pertussis	≥1:80 – условно – диагностический титр у невакцинированных лиц; ≥ 1:160 – условно-защитный титр поствакцинального иммунитета.	титр
Anti-Bordetella parapertussis	≥ 1:80 – условно – диагностический титр;	титр

При интерпретации результата необходимо учитывать прививочный анамнез. Результаты считаются положительными при исследовании парных сывороток крови, взятых с интервалом не менее чем 2 недели, при нарастании титра антител не менее чем в 4 раза.

Обращаем Ваше внимание на то, что интерпретация результатов исследований, установление диагноза, а также назначение лечения, в соответствии с Федеральным законом ФЗ № 323 «Об основах охраны здоровья граждан в Российской Федерации», должны производиться врачом соответствующей специализации.

” [“serv_cost”]=> string(3) “780” [“cito_price”]=> NULL [“parent”]=> string(2) “25” [10]=> string(1) “1” [“limit”]=> NULL [“bmats”]=> array(1) { [0]=> array(3) { [“cito”]=> string(1) “N” [“own_bmat”]=> string(2) “12” [“name”]=> string(31) “Кровь (сыворотка)” } } [“within”]=> array(1) { [0]=> array(5) { [“url”]=> string(53) “chasto-bolejushhij-rebenok-s-zatazhnym-kashlem_300037” [“name”]=> string(77) “Часто болеющий ребенок (с затяжным кашлем)” [“serv_cost”]=> string(4) “3685” [“opisanie”]=> string(2246) “

Термином часто болеющие дети обозначают детей, часто болеющих острыми респираторными инфекциями (ОРЗ). У детей с рождения до 5 лет встречается в среднем до 6-8 эпизодов ОРЗ  в год. Данная программа позволяет исключить респираторные инфекции бактериальной этиологии:  хламидийную, микоплазменную и коклюш.

Кашель является одной из частых детских проблем. В большинстве случаев кашель проходит самостоятельно, но иногда – это серьезный симптом, особенно когда он характеризуется затяжным течением. Коклюш является одной из частых причин кашля у детей и взрослых.

Типичное проявление коклюша — приступообразный кашель с характерным звуком на вдохе. У малышей первых месяцев жизни коклюш может протекать с остановками дыхания, что очень опасно. На долю хламидийной и микоплазменной инфекций приходится около 25% случаев пневмонии.

  У детей старше 5 лет около 10% бронхитов связаны с Mycoplasma pneumoniae.

Обращаем Ваше внимание на то, что интерпретация результатов исследований, установление диагноза, а также назначение лечения, в соответствии с Федеральным законом ФЗ № 323 «Об основах защиты здоровья граждан в Российской Федерации», должны производиться врачом соответствующей специализации.

” [“catalog_code”]=> string(6) “300037” } }}

Источник: https://www.cmd-online.ru/analizy-i-tseny/vozbuditeli-koklusha-i-parakoklusha-polukolichestvennoje-opredelenije-antitel_050001/

Анализ крови у детей на коклюш

Многие из заболеваний детского возраста развиваются у детей только 1 раз за всю жизнь. К ним относятся ветрянка, корь. Особое место среди данных заболеваний занимает коклюш. Мало кто знает, как проводят анализ на коклюш и зачем он нужен.

Так запрограммировано природой, что дети в силу особенностей своего иммунитета болеют чаще, чем взрослые. В первую очередь это обусловлено состоянием их иммунной системы: отсутствие антител ко многим заболеваниям, за исключением тех (антител), что прошли через гематоплацентарный барьер и попали в организм ребенка от матери.

Коклюш у детей

Коклюш — высококонтагиозное заболевание, передающееся воздушно-капельным путем. Это заболевание приходится на детский возраст; взрослые болеют им очень редко (частота встречаемости среди всех заболевших у взрослых не составляет и 0,5 процента).

Возбудитель коклюша у детей — бактерия Борде-Жангу (относится к семейству бордетелл Bordetella pertussis). Является грамотрицательной коккобациллой. Попадает в организм через верхние дыхательные пути (при вдыхании аэрозоля, содержащего микроорганизмы).

Попадая в носоглотку, микроорганизм начинает вырабатывать свой основной антиген — коклюшный токсин, на который и вырабатывается иммунный ответ. Непосредственное повреждающее влияние оказывают цитолизин и фимбрии.

Каждый из антигенов специфичен и отвечает за определенные функции (лизис эпителиоцитов, адгезия и т.д.).

Бактерия поражает преимущественно дыхательные пути и в крови выделяется крайне редко. Если удалось высеять бактерию из взятого анализа, то стоит готовиться к худшему.

Типичная картина заболевания состоит из синдромов:

• лихорадочного (повышение температуры выше 38°C);
• поражения дыхательного тракта (интенсивный кашель, который сложно спутать с другими респираторными заболеваниями);
• интоксикационного (слабость, тошнота, недомогание), неврологического (нарушение сна на фоне интенсивного кашля).

Часто из-за того, что ребенок сильно и долго кашляет, возможно появление небольших ранок или надрывов в области углов рта, на уздечке нижней губы. Наличие данных признаков косвенно позволяет поставить диагноз коклюша.

Ребенок становится заразным уже с первого дня развития заболевания. Обычно заражение происходит при контакте с другими детьми. Передача возбудителя часто наблюдается в тесных детских коллективах (сады, школы), в результате чего наблюдается массовость заражения.

Диагностика коклюша

Своевременная диагностика заболевания должна складываться из наличия типичной картины заболевания, данных анамнеза (контакт с кашляющим ребенком) и изменения лабораторных показателей. Наиболее интересующими являются носовая слизь и мазки из носо- и ротоглотки и кровь.

Как и большинство бактериальных заболеваний, коклюш диагностируется по изменениям анализов при обнаружении бактерии в исследуемом материале.

Чаще всего диагноз выставляется при исследовании мазков из носовой полости и ротоглотки, при вырастании колонии бактерий на питательной среде.

В кровь же сама бактерия проникает довольно редко (обычно ее попадание в общий кровоток, где кровь стерильна, грозит развитием сепсиса).

Анализ крови на коклюш: расшифровка

Как же можно при помощи крови определить наличие в организме бордетеллы?

В первую очередь для определения того, имеется ли в организме та или иная инфекция, следует сделать общий анализ крови. Процедура несложная и может проводиться на любом уровне оказания медицинской помощи.

В данном анализе выявляют количество клеток крови (эритроцитов, лейкоцитов, тромбоцитов и гемоглобина) в единице объема крови.

Так как коклюш заболевание бактериальное, то как и у всех подобных инфекций в крови обнаруживается увеличение лейкоцитов (лейкоцитоз) с увеличением в лейкоцитарной формуле количества нейтрофилов (определенных клеток, отвечающих за антибактериальный иммунитет). Другие компоненты анализа изменяются редко.

Более специфичным методом является серодиагностика. Принцип ее основан на определении в сыворотке крови антител, свидетельствующих о протекании инфекционного процесса, о наличии перенесенного и поствакцинального иммунитета.

Наиболее часто проводимым методом является реакция агглютинации. Метод зарекомендовал себя уже давно, используется более 50 лет. Данная методика позволяет выявить антитела, образованные к антигенам возбудителя, находящегося в первой фазе развития заболевания.

Однако, имеет данная реакция и свои недостатки — она не обладает специфичностью конкретно к бактерии коклюша.

Несомненным минусом ее является и то, что до сих пор не создано единой методики проведения данной реакции, из-за чего результаты могут интерпретироваться по-разному.

Реакция латекс-микроагглютинации

Суть реакции такова: полистироловый латекс наполняют компонентами коклюшной палочки. Исследуемую сыворотку крови (обычно разведенную в два раза) добавляют к сенсибилизированному латексу. После последующего окрашивания судят о наличии в сыворотке антител к данному возбудителю.

Реакция довольно проста и не требует массивных затрат. Однако из-за того, что в ней используются антигены клеток возбудителя, находящиеся в стадии распада, нередко реакция дает ложноположительные результаты.

Более трудоемким методом диагностики является реакция нейтрализации.

Принцип реакции основан на количественном определении вырабатываемых к коклюшному токсину антител путем оценки состояния исследуемой ткани (чаще всего реакцию проводят на специальном субстрате — клетках яичников китайских хомяков). На основании того, как изменились клетки субстрата, судят о количестве нейтрализующих антител.

Метод высокоспецифичен и позволяет определять даже самые малые концентрации антител. Минусом реакции является ее трудоемкость и сложность проведения.

Ифа диагностика коклюша

С 1980 года для диагностики заболевания используется иммуноферментный анализ (ИФА). Данная реакция является более специфичной, чем реакция агглютинации, и позволяет получить более точные и достоверные результаты (в определенных условиях).

Методика заключается в следующем: для проведения реакции можно использовать как непосредственно бактерии и бактериальные комплексы, так и компоненты их клеток, однако, при этом возрастает риск развития перекрестных реакций между антигенами коклюшной палочки и антигенами других грамотрицательных бактерий.

В среду или раствор, содержащий бактерии или их антигены, добавляли сыворотку, которую требовалось исследовать на наличие антител к возбудителю. Кроме того, в раствор добавляли специальные флуоресцеин-содержащие ферменты, которые оседали на образованном комплексе антиген-антитело, и в результате исследования делали данные комплексы видимыми под микроскопом (реакция флуоресценции).

При сравнении полученных результатов было видно, что наиболее точные результаты были достигнуты при определении антител к коклюшному токсину, ФГА и комплекса (ФГА, пертактин и КТ).

Данная методика оправдывает себя при определении антител на 4 неделе развития заболевания. До этого в крови антител мало (преобладают среди них иммуноглобулины класса М).

На более ранних этапах развития заболевания серологические методы не особо эффективны и уступают по результативности бактериоскопии, ПЦР и посевам на питательные среды.

Вышеуказанные серологические методы начинают проводиться уже с 4 недели развития заболевания. Диагноз коклюша считается обоснованным при наличии титра антител не ниже 1:80.

Коклюш у детей: особенности

Следует помнить, что у детей картина крови может иногда отличаться от классических проявлений коклюша.

Довольно часто наблюдается развитие иммунодефицита примерно на 2-3 неделе развития заболевания.

Высок риск присоединения оппортунистической инфекции, из-за чего первичная диагностика коклюша может замедляться, скрываться за клиникой вторичного заболевания.

Кроме того, присоединение другой инфекции может вызвать осложнения, из-за которых сам коклюш будет отодвинут на второй план, и лечение будет назначено несвоевременно.

В некоторых случаях может наблюдаться следующий парадокс — казалось бы, заболевание было пролечено и все клинические признаки ушли, однако картина крови остается все той же (нейтрофильный лейкоцитоз и ускоренная СОЭ). Подобная картина может наблюдаться у ослабленных детей с имеющимся иммунодефицитом за счет более длительного персистирования антигенов бактерии Борде-Жангу в организме и замедленной их элиминации.

Коклюш у детей: прививка

Как показывает практика, прививка против коклюша не всегда эффективна. Об этом свидетельствует тот факт, что риск заболеть коклюшем остается и у привитых детей (хотя они заболевают примерно в 6 раз реже, чем непривитые), и у взрослых (у них клиническая картина более стерта и заболевание может протекать под видом ОРВИ).

Обычно привитые дети заболевают в результате недостаточной выработки иммунитетом необходимых антител (в данном случае необходима пункция или трепанобиопсия костного мозга для диагностики хронических заболеваний крови). В результате этого риск заболевания у привитых детей возрастает спустя 3-4 года после перенесенной прививки.

При этом у привитых детей часто наблюдается картина относительного лейкоцитоза. В отношении выработки антител применим термин «бустер-эффект» — интенсивная выработка иммуноглобулинов уже на второй неделе развития заболевания.

Коклюш у детей: результаты анализов

Как было сказано выше, высевание бактерии из мазка крови крайне неблагоприятно. Это означает, что бактерия уже не развивается в виде локального заболевания, а вышла на системный уровень.

Это грозит массивным размножением микроорганизма (кровь является прекрасной средой для развития любого микроорганизма, а в отношении бордетеллы — среда, содержащая кровь, является единственной, на которой бактерия растет).

В результате разноса микроорганизма по органам развивается синдром диссеминации, лечение которого крайне сложное и чаще всего не заканчивается успешно. В данном случае, если во время посева крови удалось высеять бактерию, пациент должен экстренно быть доставлен в отделение реанимации для проведения соответствующего лечения (существует угроза жизни).

Иногда результаты анализов могут быть ложноположительными. Это наблюдается в результате персистирования в организме антигенов бактерии (после перенесенного коклюша).

Реже наблюдается ситуация перекрестной реакции антигенов, когда при наличии другого граммотрицательного микроорганизма проведение тестов на антитела к коклюшу дают положительный результат.

В данном случае единственным методом диагностики является ПЦР для установления типа генетического материала, вызвавшего подобную реакцию микроорганизма.

Подводим итоги

Если все же был коклюш у детей, при правильной диагностике и своевременном лечении картина крови должна нормализоваться.

В пределах нормы считается состояние, при котором лейкоцитоз может наблюдаться некоторое время (обычно до полутора недель) после перенесенного заболевания.

После этого в крови появляются специфические иммуноглобулины класса G, которые отвечают за развитие постоянного, пожизненного иммунитета против коклюша. Выявление данных антител проводится серологическими методами.

Несмотря на то что коклюш является заболеванием преимущественно детского возраста, знать о том, как оно проявляется, должен каждый человек. Не существует стопроцентной гарантии того, что заболевание не разовьется даже у привитого или перенесшего его человека. Именно поэтому крайне важно знать о том, как может проявиться заболевание, где и каким образом диагностировать его развитие.

Источник: http://101analiz.ru/diagnostika-zabolevanij/analiz-krovi-na-koklyush.html

Анализ на коклюш: как сдавать, исследование крови, мазок и лабораторная диагностика

Коклюш — это бактериальная инфекция, вызываемая коккобациллой Bordetella pertussis. Для диагностики этого заболевания используются различные лабораторные исследования, правильный анализ на коклюш позволит определить не только наличие болезни, но и ее стадию.

• Общие лабораторные исследования
• Отличительные признаки колоний
• Микроскопическое исследование
• Экспресс-анализы на антигены

Дифференциальная диагностика

Заподозрить коклюш следует при наличии у больного следующих симптомов:

• кашель неясного происхождения продолжительностью более 2 недель,
• приступы тяжелого кашля,
• симптомы ОРВИ после контакта с больным.

Диагностика коклюша начинается с дифференциации его с острыми респираторными болезнями, гриппом, корью, обострением бронхиальной астмы, бронхоаденитом и попаданием в дыхательные пути инородного тела.

Дифференциальный диагноз основывается на следующих чертах похожих заболеваний:

1. Грипп начинается остро, наблюдаются симптомы интоксикации (лихорадка, нейротоксикоз), которые преобладают над симптомами поражения верхних дыхательных путей.
2. Корь отличается присутствием насморка, чихания, слезотечения, отечности слизистых оболочек наряду с кашлем, чего также не бывает при коклюше.
3. ОРВИ, как и грипп, сопровождаются симптомами интоксикации и поражения слизистых. Разные вирусные инфекции могут характеризоваться воспалением глотки, признаками воспаления бронхов, отеком слизистых, конъюнктивитом.
4. Туберкулез характеризуется схожими приступами сильного кашля. Для дифференциации болезней требуются рентгенография и реакция Манту.

Таким образом, характерная клиническая картина представляет собой длительные приступы кашля с репризами и лимфоцитоз, признаков интоксикации и поражения слизистых оболочек при этом нет, что позволяет отличить болезнь от вирусных инфекций — в этом и заключается дифференциальная диагностика коклюша.

При подозрении на коклюш для подтверждения диагноза используются различные лабораторные методы исследования. Основными являются ПЦР и бактериологический анализ на ранних сроках, серологическая диагностика — на поздних.

Общие лабораторные исследования

Общий анализ крови на коклюш позволяет определить состав крови и обнаружить наличие лейкоцитоза. Как и в случае других бактериальных заболеваний, при коклюше количество лейкоцитов на единицу крови возрастает, что свидетельствует об иммунном ответе на поражение возбудителем. Как правило, выделяют концентрацию лейкоцитов, равную 2–7*109/л.

Следует учитывать, что содержание лейкоцитов разнится в зависимости от того, насколько тяжело протекает заболевание, если больной ранее был привит, но из-за ослабления иммунитета все равно заболел, анализ крови ничего не покажет.

Другие общие характеристики крови, как правило, не меняются, сдвиги наблюдаются только в катаральной стадии болезни. Скорость оседания эритроцитов может быть сниженной.

В большинстве случаев гематологическая лабораторная диагностика коклюша ограничивается общим анализом крови, для выявления возможных осложнений также может проводиться биохимическое исследование, дополняемое общим анализом мочи. Если болезнь протекает благоприятно, все показатели будут в норме.

Для дифференциации коклюша с астмой, гриппом и туберкулезом нужно сдать общий анализ мокроты.

Мокрота при нормальном течении болезни является слизистой, если болезнь осложнена пневмонией, к слизи добавляется гной.

Для уточнения диагноза широко применяется микробиологическая диагностика коклюша, к которой относится бактериологическое исследование (выделение культуры возбудителя) и серологическое обследование (анализ на антитела).

Дополнительно может использоваться генетическое исследование — выделение ДНК возбудителя в мокроте при помощи полимеразной цепной реакции (ПЦР). На поздних стадиях болезни ПЦР неэффективен.

Бактериологическая диагностика

Бакпосев помогает определить заболевание у ребенка или взрослого в течение короткого периода после заражения — колонии возбудителя в питательной среде и температуре 36°С начинают появляться уже на 3–5 сутки.

Посев на коклюш делается на материале из носоглотки пациента — мокроте, слизи, собранном при кашле или искусственным путем.

Собирается материал с задней стенки глотки, через 2–3 ч после приема пищи. Применяется три метода сбора слизи:

• «кашлевые пластинки» — больной кашляет на чашку Петри с питательным субстратом, на котором бациллы, попавшие из капель слизи, размножаются в течение 2–4 дней,
• мазок из зева при помощи тампонов — ватные тампоны, смоченные в альгинате кальция, вводят через нос в носоглотку и оставляют на 10 с, после чего помещают в питательную среду,
• сбор шприцем через тонкий назальный катетер.

Для бактериологического исследования на коклюш важен правильный выбор питательной среды, так как бацилла Bordetella pertussis размножается только в элективных средах. Вариантов три:

1. Казеиново-угольный агар. Среда готовится из сухого субстрата, 5 г которого растворяется в 100 мл воды, после чего добавляется цефалексин в концентрации 40 мг/л. Смесь стерилизуется в автоклаве 30 мин при 110°C. Колонии бактерий образуются через 3–4 дня.

2. Среда Борде-Жангу, используемая, если из-за тяжелого течения болезни анализ на коклюш требует сбора материала непосредственно у постели пациента. Готовится субстрат из 0,5 кг картофеля, 1 л воды и 40 мл глицерина.

   Смесь варится до размягчения картофеля, после чего в нее доливается вода до исходной концентрации. Смесь фильтруется, в экстракт добавляется раствор комплекса солей в количестве 1,5 л на 500 мл субстрата. Далее добавляется 3% агар-агара, смесь кипятится и доводится до достижения pH = 7,1–7,2. После фильтрации и стерилизации субстрат может долго храниться.

3. Молочно-кровяной агар Осиповой. Смешиваются 5% МПА, 1% хлорида натрия и такое же количество теплого обезжиренного молока. Смесь стерилизуется в автоклаве, фильтруется, после чего к ней добавляется 1/5 часть дефибринированной животной крови. Для исключения посторонней флоры добавляется 0,25–0,5 ед. пенициллина на 1 мл среды.

Следует учитывать, что колонии бактерий медленно развиваются — окончательный результат исследования может быть получен лишь на 5–7 сутки после посева. Этот анализ на коклюш эффективен только на ранних сроках заболевания. Из-за особенностей возбудителя окончательный диагноз на основании бактериологической диагностики ставится лишь в 15–25% случаев (данные по г. Санкт-Петербург).

Отличительные признаки колоний

На разных субстратах колонии возбудителя коклюша проявляются по-разному, важно знать их основные признаки, чтобы дифференцировать со схожими колониями бактерий паракоклюша.

Среда Коклюш Паракоклюш

КУА	Мелкие, выпуклые колонии коккобактерий. Блестят, имеют гладкую текстуру и кремовый цвет.	Более крупные размеры, окрашивают субстрат в коричневатый оттенок. Бактерии — палочки.
Борде-Жангу и агар Осиповой	Гладкие, блестящие колонии коккобактерий. Прозрачные, имеют куполообразную форму и жемчужный оттенок. Окружены четкой гемолизной зоной.	Крупные колонии палочек с коричневым цветом среды. Имеется зона слабого гемолиза.

Колонии коклюша нужно также отличать от бактерий септического бронхита. Последние, в отличие от кокков, растут на субстрате без изменения цвета среды и имеют уреазу.

Микроскопическое исследование

Методы диагностики коклюша иногда включают микроскопическое исследование в качестве вспомогательного. Взрослые бактерии коклюша не имеют отличительных морфологических особенностей, но на ранних стадиях развития их можно определить.

На I фазе жизни бактерии имеют S-форму. Они грамотрицательны, отличаются мелкими размерами и однородностью.

Представляют собой палочки без спор с нежными капсулами. На II и III фазах бактерии превращаются в полиморфные или коккоидные формы жизни.

Серологические анализы на коклюш

Поскольку прямые методы исследования (бактериологический и ПЦР) дают результаты только на ранних стадиях развития заболевания, при сроке более 3 недель от заражения используются серологические методы — анализы на антитела к коклюшу. Основная их цель — выявить наличие иммуноглобулинов IgM в крови и IgA в слизи.

Эти антитела сохраняются в крови на протяжении нескольких месяцев после начала заболевания, через месяц после заражения образуются иммуноглобулины IgG, сохраняющиеся в течение нескольких лет и позволяющие определить, переболел ли пациент коклюшем в прошлом.

Основные серологические методы исследования (РПГА, РА, РНГА) применяются также для эпидемиологического анализа. Диагностический титр при реакции пассивной гемагглютинации у непривитого ребенка, не перенесшего коклюш в прошлом — 1:80. У привитых и взрослых пациентов титры считаются диагностическими при нарастании в 4 раза.

Иммуноферментный анализ на иммуноглобулины IgM и IgA — это более современный метод анализа на коклюш у детей и взрослых.

Интерпретировать положительные (+) и отрицательные (-) результаты можно следующим образом:

IgM IgA IgG Расшифровка

,	,	,	коклюш не обнаружен
,	, или +	, или +	протекающее заболевание
,	+	, или +	коклюш перенесен недавно
,	,	+	коклюш перенесен давно или была проведена иммунизация

Экспресс-анализы на антигены

Существует два метода анализа, позволяющие диагностировать коклюш в сжатые сроки:

1. Иммунофлюоресцентный. Обнаруживает корпускулярные антигены в слизи на стенке глотки. Результат доступен уже через 2–6 ч.
2. Латексная микроагглютинация. Выявляет антигены B. pertussis в течение 30–40 мин.

ПЦР также является быстрым методом анализа, его недостатком является невозможность применения на поздних сроках заболевания. Экспресс-диагностика коклюша у детей позволяет ускорить постановку диагноза и начало лечения, а также повысить процент лабораторных подтверждений коклюша.

Загрузка…

Источник: https://prof-medstail.ru/bolezni-legkih/diagnostika-koklyusha

Анализ на коклюш и паракоклюш у детей как сдавать – Про анализы

Коклюш и паракоклюш относятся к инфекционным болезням, возбудителем которых является коклюшная палочка (Bordetella parapertussis). Коклюш и паракоклюш практически ничем не отличаются друг от друга.

Основное различие – более легкое протекание второго заболевания в отличие от первого. Обе эти инфекции негативно отражаются на состоянии нервной системы, также происходит поражение дыхательных путей.

Наиболее характерной особенностью коклюша и паракоклюша является специфический приступообразный кашель, который может привести к отделению мокроты, а иногда к рвоте. Паракоклюш и коклюш являются одними из наиболее часто встречающихся инфекционных болезней среди детей.

Как и многие другие заболевания, свойственные именно детям, коклюш и паракоклюш то заболевание, которое переносится только один раз за всю жизнь.

Диагностирование заболевания

В настоящее время диагностика коклюша и паракоклюша представляет собой оценку всей картины заболевания и имеющихся симптомов. Особенное внимание уделяется исследованию слизи из носа и взятию мазков из носоглотки и ротоглотки. Также не остаются без внимания анализы крови, любых изменения в них должны быть выявлены врачом.

Так как коклюш и паракоклюш относятся к инфекционным болезням, диагностируются они по обнаружению бактерии (коклюшной палочки) в исследуемом образце крови. Но наиболее часто признаки заболевания выявляются во время исследования мазков, так как в кровь бактерия проникает довольно редко.

к оглавлению ↑

Анализ крови на коклюш и паракоклюш

Для того чтобы точно установить наличие болезни, пациенту необходимо сдать анализ крови на коклюш и паракоклюш.

1. Для начала нужно сдать кровь на проведение общего анализа. На этом этапе будет определено количество лейкоцитов, тромбоцитов и гемоглобина. Коклюш и паракоклюш относятся к инфекционным заболеваниям, поэтому при наличии коклюшной палочки будет замечено увеличение количества лейкоцитов, а также количества нейтрофилов, так как они отвечают за антибактериальный иммунитет. Остальные компоненты крови практически не меняются.
2. Наиболее эффективным анализом на обнаружение коклюшной палочки является иммуноферментный анализ. Для его проведения у пациента с подозрением на коклюш или паракоклюш будет взят образец крови из вены. Данный анализ представляет собой выявление антител иммуноглобулинового белка к возбудителю заболевания. Его можно осуществлять не ранее, чем через три недели после начала болезни. Поэтому его основной задачей является скорее подтверждение диагноза, чем выявление заболевания.
3. Также существует серологический метод анализа крови на выявление заболевания. Он основывается на определении количества антител к коклюшу и паракоклюшу, которые показывают наличие в организме инфекционного процесса.
4. К различным видам анализа крови для выявления коклюшной бактерии относится и реакция агглютинации. С помощью реакции агглютинации производится обнаружение антител к антигенам возбудителя, который находится на начальной стадии течения болезни. К недостаткам такой процедуры можно отнести то, что на данный момент до сих пор не существует единого метода проведения реакции агглютинации. Поэтому значение полученных результатов можно воспринимать и расшифровывать по-разному.

к оглавлению ↑

Расшифровка результатов анализов

При выявлении коклюшной палочки в результате изучения анализа крови, можно говорить о том, что коклюшная палочка перешла на новый уровень развития. То есть существует не как локальное заболевание, а развивается на системном уровне.

В таком случае, есть вероятность обширного размножения микроорганизма, так как кровь – отличная среда для успешного развития практически любого микроорганизма.

Если рассматривать конкретно коклюшную палочку, то для этой бактерии единственной благоприятной средой для осуществления ее роста является кровь.

Если во время изучения результатов анализа крови было выявлено наличие в организме коклюшной палочки, то пациента необходимо в срочном порядке госпитализировать в реанимационное отделение для оказания медицинской помощи и назначения необходимого лечения. Это необходимо сделать как можно быстрее, так как существует довольно серьезная угроза жизни пациента.

Бывают случаи, когда результаты анализов оказываются ложноположительными. Такое явление часто встречается в результате персистирования в организме пациента антигенов коклюшной палочки (после уже вылеченного коклюша или паракоклюша).

Не так часто можно наблюдать ситуацию, когда происходит перекрестная реакция антигенов. Если в организме находится какая-либо другая граммотрицательная бактерия, то результат проведения анализа на выявление антител к коклюшу может быть определен как положительный.

В данной ситуации единственным методом диагностирования заболевания является ПЦР для выявления типа генетического материала, который мог спровоцировать организм на такую реакцию.

к оглавлению ↑

Особенности диагностики коклюша у детей

Часто встречаются случаи, когда показатели анализа крови у детей существенно отличаются от стандартных проявлений коклюша и паракоклюша.

К тому же параллельное развитие какой-то другой инфекции может спровоцировать осложнения, из-за чего лечение коклюша и паракоклюша будет произведено не вовремя.

У некоторых пациентов могут быть замечены специфичные случаи. Даже после успешного лечения заболевания и избавления от всех симптомов, может оставаться тот же результат анализа крови.

Это наиболее свойственно довольно ослабленным детям, которые обладают иммунодефицитом. Происходит это за счет более долгого персистирования и медленно протекающей элиминации в организме ребенка антигенов бактерии Борде-Жангу.

Даже в случае перенесенного заболевания, в случае его правильной диагностики и лечении, результаты анализа крови должны прийти в норму.

Нормальным считается состояние, когда лейкоцитоз выступает только как временное явление, которое не длится более чем 1,5 недели после полного излечения заболевания. В дальнейшем в крови образуются иммуноглобулины класса G.

Они отвечают за наличие постоянного иммунитета против коклюша и паракоклюша. Обнаружение таких антител происходит методом серологического анализа.

Нет гарантии того, что даже перенесший заболевание и привитый человек не сможет во второй раз заболеть коклюшем или паракоклюшем. Поэтому очень важно обладать необходимыми знаниями об этой болезни.

• Статья помогла вам?
• Дайте нам об этом знать — поставьте оценку

Источник:

Как сдавать анализ на коклюш и паракоклюш у детей

Коклюш – это детское заболевание, для которого характерен судорожный кашель. Болезнь часто протекает в скрытых или атипичных формах. Поэтому своевременная и точная диагностика затруднительна.

Среди людей существует мнение о том, что паракоклюш является следствием или осложнением коклюша. Однако это утверждение ошибочно. Паракоклюш – это инфекционная болезнь, которой дети болеют гораздо меньше. Невозможно при сборе анамнеза идентифицировать эти болезни.

Поэтому маленьким пациентам назначают анализ на коклюш и паракоклюш, который включает обширное лабораторное исследование.

Заболевания вызывают патогенные микроорганизмы – специфические бактерии – коклюшная и паракоклюшная палочки, палочка Борде-Жангу. Коклюш – это распространенное заболевание, ежегодно фиксируется 60 миллионов случаев, из которых более полмиллиона приводят к летальному исходу. Поэтому своевременная диагностика крайне важна.

Бактериологические исследования

Окончательный диагноз утверждается только на основе бактериологического анализа, при котором выделяют самого возбудителя. Результативность исследования зависят от периода заболевания. Чем раньше сдать анализ, тем больше шансов обнаружить палочку.

На разных этапах болезни бактериологические показатели отличаются. Первые 7 дней заболевания анализ положительный у 95% пациентов, на 2-3 неделе этот показатель составляет 65-75%. К концу первого месяца заболевания палочка обнаруживается у каждого второго ребенка. После 5-й недели болезни результаты отрицательные.

Взятие мазка

Мазок на коклюш – это бактериологическое исследование отделяемого слизистой носоглотки. Забор материала делают исключительно натощак или через 2 часа после еды и тщательного полоскания горла.

Техника взятия слизи и приготовления мазка:

• для правильного забора материала использую стерильный марлевый или ватный тампон, предварительно намотанный на железную или деревянную палочку;
• тампон перед анализом смачивают в физрастворе и помещают в пробирку;
• больному в положении сидя или лежа вводят тампон в ротовую полость так, чтобы он не касался внутренней поверхности губ, языка, зубов;
• аккуратно собирают серозно-гнойный налет и слизь на миндалинах, небе, задней стенке носоглотки;
• для точной результативности налет лучше снимать в местах, где проходит граница между здоровой и пораженной тканью;
• взятый материал наносят на лабораторное стекло, маркируют, высушивают и отправляют в лабораторию для дальнейшего исследования.

Посев на коклюш и паракоклюш является золотым стандартом в диагностике этого заболевания. Он наиболее информативен в катаральный (острый период), в первые дни заболевания.

https://www.youtube.com/watch?v=51n7O7Jpce8

Сама процедура при сдаче материала не вызывает дискомфорта или болевых ощущений как во время проведения, так и после забора материала. Однако маленькие дети часто сопротивляются.

В этом случае необходима помощь другого медицинского работника или родителей для фиксации малыша.

Серологические методы исследования

Анализ крови на коклюш и паракоклюш для серологического исследования назначают тем пациентам, которые болеют не менее 3 недель. За это время в крови ребенка вырабатываются антитела, которые и необходимо обнаружить при исследовании. На ранних стадиях болезни этот метод не информативен.

ПЦР – полимеразную цепную реакцию при коклюше назначают чаще всего, так как ее результаты наиболее точные. Для исследования собирают мокроту. Анализ на определение антител к коклюшу проводится на автоматизированном оборудовании.

Результаты оцениваются согласно нарастанию титров специфических антител к возбудителю. Анализы проводят несколько раз. Чем дольше человек болеет, тем титры продолжают увеличиваться, несмотря на угасание симптомов.

Повторные анализы делают с интервалом 5-7 дней.

Правила забора крови у детей:

1. Сдавать кровь нужно натощак, лучше с утра, через 12 часов после последнего приема пищи. В это время можно пить воду. Если ребенок грудного возраста, кормления разрешаются.
2. Кровь берут из вены путем пункции. Прием лекарств перед анализом может дать ложный результат.
3. Кровь берут в стерильную пробирку (пустую или с гелем).
4. После того как ребенок сдал анализ, можно возвращаться к обычному режиму дня и приему лекарств.

РПГА – реакция пассивной гемагглютинации. Этот метод определяет не только титры к антителам, он также позволяет выяснить чувствительность организма к антибактериальным препаратам и правильно подобрать лекарственные средства индивидуально каждому ребенку. Кровь также сдается натощак из локтевой вены.

Анализ обладает высокой специфичностью, поэтому его часто назначают для определения бактериальной инфекции.

При попадании микроба в организм, как иммунный ответ формируются антитела, которые адсорбируются на поверхности эритроцитов.

При исследовании добавляют специальную сыворотку, которая приводит к их агглютинации (склеиванию). Эта реакция позволяет опровергнуть или подтвердить наличие возбудителя в организме.

При исследовании определяют количество эритроцитов, выпавших в осадок. Результат предоставляют в виде титров антител.

Общие клинические анализы

• При коклюше и паракоклюше, как при любых инфекционно-воспалительных заболеваниях, назначают общее клиническое исследование крови.

• Основные показатели крови, такие как эритроциты, тромбоциты, гемоглобин, СОЭ (скорость оседания эритроцитов) без особых изменений.
• В острый период заболевания могут быть повышены лейкоциты и лимфоциты.

Время взятия общего анализа крови при коклюше значение не имеет. Прием пищи или лекарств не влияет на лейкоцитарную формулу и количественный состав компонентов крови.

Источник: https://crbkukmor.ru/na-onkologiyu/analiz-na-koklyush-i-parakoklyush-u-detej-kak-sdavat.html